挑战是一种特殊的玩法，游戏开始时玩家通常会获得一些指定的道具，但坏处是玩家每一层都会受到诅咒，而且没有宝物房。游戏里一共有二十个挑战：

　　1.Pitch Black漆黑一片

　　你看不见你的血量，房间的光线更暗。

　　有宝物房。

　　终点：妈腿

　　解锁方式：自带

　　解锁：Rune of Hagalaz(摧毁房间里所有可被破坏的物体;一次性可拾取道具)

　　2.High Brow达官显贵

　　起始道具：Number One(尿)，E. Coli(翔之触)，Butt Bombs(翔炸弹)，Enema(将所有敌人变成翔;主动)，Petrified Poop(饰品)

　　无宝物房。

　　终点：妈腿

　　解锁方式：自带

　　解锁：Rune of Jera

　　3.Head Trauma头部创伤

　　起始道具：Tiny Planet(眼泪围着你转), Soy Milk(大幅降低攻击，将射速提到堪比technology 2的射速水平),Small Rock(加攻击) 和 Iron Bar(有几率射出铁眼泪来困惑敌人)

　　无宝物房。

　　终点：妈腿

　　解锁方式：自带

　　解锁：Rune of Ehwaz(生成一个陷阱门，同We Need To Go Deeper)

　　4.Darkness Falls黑暗降临

　　起始道具：Pentagram(加攻击), Dead Bird(受到攻击放出可以攻击的小鸟),Whore of Babylon, Razor Blade(自残来加攻击力),Sacrificial Knife(生成一个匕首在你身边转) 和 Dark Matter(使被打到的敌人受到恐惧效果)

　　无宝物房。

　　终点：撒旦

　　解锁方式：未知

　　解锁：Rune of Dagaz

　　5.The Tank坦克

　　起始道具：Lard(加两格血上限), Infamy(减免一定的伤害), Yum Heart(回复1格血;主动，4充能)和 Thunder Thighs(加1血上限，减速，并使你可以通过走到环境物上来摧毁它们)

　　无宝物房。

　　终点：妈腿

　　解锁方式：解锁抹大拉

　　解锁：Rune of Ansuz(显示所有地图，包括隐藏房)

　　6.Solar System太阳系

　　起始道具：Transcendence(移除身体，并获得飞行), Distant Admiration(生成一个红苍蝇在你稍远的地方转), Forever Alone(生成一个蓝苍蝇在远的地方转), Halo of Flies(生成两个白苍蝇在你身边转)

　　无法发射眼泪(环绕物是你唯一的攻击手段)

　　无宝箱房。

　　终点：妈心

　　解锁方式：在身边满环绕物(肉，苍蝇)的情况下通关

　　解锁：Rune of Perthro(D6!重新随机当前房间内的道具)

　　7.Suicide King自杀之王

　　起始道具：Ipecac(将攻击方式替换为用抛物线投出爆炸性的带毒眼泪), Mr. Mega(增加爆炸威力), My Reflection(使发出的眼泪像回旋镖一样返回人物), 随机的胶囊

　　无宝物房。

　　终点：以撒

　　解锁方式：解锁My Reflection

　　解锁：???

　　8.Cat Got Your Tongue无言以对

　　起始道具：Guppy*s Head(产生蓝苍蝇), Guppy*s Tail(提升清理完房间时掉落箱子的几率), Guppy*s Hairball(一个跟在你身后的毛球，通过将其向前甩来攻击;杀死敌人后会变大，并提升攻击力)

　　无法发射眼泪(开始时只能通过毛球来攻击)

　　终点：妈腿

　　解锁方式：通过收集齐猫套变成Guppy

　　解锁：Rune of Alzir(获得长时间的无敌效果)

　　9.Demo Man破坏者

　　起始道具：Dr. Fetus(将攻击方式替换为向前投出一个炸弹), Remote Detonator(按下空格键来引爆炸弹，否则炸弹不会爆炸(对Dr.Fetus发出的炸弹无效)), Matchstick(饰品)

　　无宝物房。

　　终点：妈心

　　解锁方式：解锁Dr.Fetus

　　解锁：The Chaos Card

　　10. Cursed!被诅咒的

　　起始道具：Yum Heart(回复1格血;主动，4充能), Raw Liver(加两格血上限，并回复所有红心),The Compass(显示特殊房间的位置(Boss房，宝物房，挑战房，诅咒房，献祭房，赌博房)), Treasure Map(显示地图), Blue Map(显示隐藏房间和超级隐藏房间的位置), Child*s Heart(完成房间有几率掉落心) 饰品.

　　所有正常房间的门都被替换为刺门(通过时减半格血)

　　有宝物房。

　　终点：妈腿

　　解锁方式：解锁抹大拉

　　解锁：Credit Card(在商店里使用信用卡会买下所有的道具，使你的角色可以“免费”捡起地上的道具)

　　11.Glass Cannon玻璃大炮

　　起始道具：Epic Fetus(将攻击方式替换为空袭(用方向键控制红色准星，1-2秒后从天上掉落一颗导弹))

　　无宝物房。

　　终点：撒旦

　　解锁方式：未知

　　解锁：The Rules Card

　　12.When Life Gives You Lemons当生活给你柠檬

　　起始道具：Lemon Mishap(在地上生成一滩柠檬汁，对踩在上面的敌人造成伤害), 9 Volt(减少1格道具充能时间),Habit(受到伤害时为道具充能) 1 Lemon Party (胶囊，在地上生成超大型柠檬水)

　　终点：妈腿

　　解锁方式：自带

　　解锁：Card Against Humanity(填充所有非岩石和角色的地方为翔)

　　13.Beans!豆

　　起始道具：Pyro(获得99个炸弹),The Bean(排气并伤害敌人)

　　无法发射眼泪(只能通过炸弹和The Bean来造成伤害)

　　无宝物房。

　　终点：妈腿

　　解锁方式：自带

　　解锁：Burnt Penny(拾起硬币时有几率获得炸弹)

　　14.It*s in the Cards命中注定

　　起始道具： Deck of cards(可以生成卡牌), Starter deck(可以同时拿着两张卡牌，卡片不再生成), Battery(使主动道具可以过度充能，即充满时可以使用两次), AAA battery(饰品;降低主动道具1格充能要求), 2 张随机塔罗牌

　　无宝物房。

　　终点：妈腿

　　解锁方式：自带

　　解锁：SMB Super Fan

　　15.Slow Roll缓慢滚动

　　起始道具：Polyphemus(大幅提升攻击力，大幅降低射速), My Reflection(使发出的眼泪像回旋镖一样返回人物), Cupid*s Arrow(使眼泪可以穿过敌人)

　　无宝物房。

　　终点：妈腿

　　解锁方式：自带

　　解锁：Swallowed Penny(饰品;受到伤害时掉落硬币)

　　16.Computer Savvy精通电脑者

　　起始道具：Technology(将攻击方式替换为激光，可穿透敌人), Technology 2(发射一条激光，造成持续伤害)和Spoon Bender(使攻击可以追踪敌人)

　　无宝物房。

　　终点：妈腿

　　解锁方式：自带

　　解锁：Robo-Baby 2.0(会发射激光的小跟班，使用方向键来控制)

　　17.Waka Waka小精灵

　　起始道具：Strange Attractor(发射出的眼泪会吸引敌人),Anti-Gravity(发射的眼泪会停留在原地，直到松开方向键或达到最大值10个)

　　无宝物房。

　　终点：妈腿

　　解锁方式：自带

　　解锁：Death*s Touch(替换眼泪为镰刀，增加伤害，可以穿透敌人;失去击退效果)

　　18.The Host寄主

　　起始道具：Spiderboy(受到伤害时生成蓝蜘蛛), Mulligan(攻击到敌人时有几率生成蓝苍蝇), 和the Tick(饰品，无法替换或摘下;减少boss血量，并回复自身)

　　无宝物房。

　　终点：妈腿

　　解锁方式：自带

　　解锁：Technology 0.5(在角色的头中间的激光，发射激光的间隔为随机)

　　19.The Family Man居家男人

　　起始道具：Brother Bobby(发射基础眼泪的小跟班), Sister Maggy(发射高伤害眼泪的小跟班), Dad*s Key(打开房间里所有的门(包括因有敌人而锁住的门和通往超级撒旦的门)), BFFS(增加小跟班和环绕物的体积;使玩家可以第二控制来控制小跟班的射击方向)和 Rotten Baby(生成蓝苍蝇来攻击)

　　无法使用眼泪。

　　无宝物房。

　　终点：以撒

　　解锁方式：解锁Dad*s Key

　　解锁：Epic Fetus

　　20.Purist纯粹主义者

　　无宝物房。

　　终点：妈心

　　解锁方式：打败妈腿一次

　　解锁：Rune of Berkano(召唤蓝蜘蛛和蓝苍蝇)

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